層析填料壽命短，多留意這些因素

各位小伙伴在做蛋白純化時，是否會苦惱“誒，我用的填料咋沒用幾次就不行了呢”。在篩選填料時會反復(fù)的考察填料壽命。不過，各位小伙伴需要留意了，填料壽命短有可能是你在使用蛋白層析填料時這些因素沒有考慮周全。

01 重復(fù)裝柱

每次裝柱的過程都涉及到填料的脫氣處理，及裝填柱床時的壓縮柱床，然后脫氣時的超聲或者抽濾都會對填料施壓，壓縮柱床也要對填料施壓，反復(fù)的施壓及壓力控制不當(dāng)也會使填料的物理性能發(fā)生變化從而影響填料的壽命。

柱床被嚴(yán)重污染或者進(jìn)氣泡時，拆裝清洗比CIP效果更好，更有利于填料壽命衰減的降低。

02 樣品狀態(tài)

 a.樣品澄清度：樣品越澄清對填料的壽命衰減影響越小。

 b.樣品粘度：樣品的粘度越小，對填料壽命的影響越小。

 c.樣品酸堿度：過酸過堿都會加速填料壽命的衰減。

 d.樣品離子強(qiáng)度：離子強(qiáng)度越高填料壽命衰減的越快。

 e.樣品成分組成：樣品成分越復(fù)雜，層析過程越復(fù)雜，填料的壽命衰減越塊（這也與填料所處的工藝階段吻合，捕獲粗純階段填料壽命衰減的更快，精純階段填料壽命衰減的慢。）

03 層析工藝

a.柱床高度，流速及反壓越大，工藝過程填料受到的外力就會增大，填料的壽命衰減就會增大。

b.層析工藝過程的緩沖液的種類及洗脫的CV數(shù)也會影響填料的壽命，緩沖液越溫和對填料壽命衰減影響越小，洗脫CV數(shù)越小對填料壽命衰減影響越小。

04 維護(hù)保養(yǎng)

合理的維護(hù)保養(yǎng)過程可以降低填料壽命的衰減，但是維護(hù)過程的CIP及消毒過程通常都需要劇烈的條件，如強(qiáng)酸強(qiáng)堿等，所以CIP的強(qiáng)度及頻率越大對填料的壽命衰減影響越大。

a.再生：恢復(fù)介質(zhì)原有功能。

 b.清洗（CIP)：去除填料中積累的雜質(zhì)及污染物，比再生劇烈。

 c.消毒：去內(nèi)毒素及微生物。

 d.保存：使用后合理保存（溫度，保存液）。

常見的離子交換層析填料清洗

日常清洗

離子交換樹脂每次使用后可以用 1M NaCl 甚至更高離子強(qiáng)度溶液或高 pH 溶液清洗，然后用至少 5 倍柱體積的 Buffer 進(jìn)行平衡至離子強(qiáng)度或 pH 值穩(wěn)定。

CIP（Cleaning In Place）清洗

離子交換樹脂可以重復(fù)使用而無需再生，但隨著非特異性結(jié)合的蛋白的增多和蛋白的聚集，往往造成流速和結(jié)合載量都下降，這時可按照下面方法對樹脂進(jìn)行清洗。

去除一些沉淀或變性物質(zhì)，建議使用下面的方法

用 2 倍柱體積的 1M NaOH 溶液進(jìn)行清洗，然后立即用 5 倍柱體積的 PBS, pH 7.4 清洗。

去除一些疏水性吸附造成的非特異性吸附物質(zhì)

用 3-4 倍柱體積的 70%乙醇或 3-4 倍柱體積的 1% Triton™ X-100 清洗，然后立即用 5 倍柱體積的 PBS, pH 7.4 清洗。

去除一些離子鍵結(jié)合物質(zhì)

用 3-4 倍柱體積的 2M NaCl 清洗，然后立即用 5 倍柱體積的 PBS, pH 7.4 清洗。